El tejido muscular es un objetivo importante de los esteroides sexuales, y en particular, la testosterona desempeña roles esenciales en el metabolismo de las células musculares. Una amplia gama de estudios ha reportado diferencias sexuales en la esteroidogénesis muscular basal, y recientemente se han identificado varios genes que están regulados por elementos de respuesta a andrógenos que muestran diferencias sexuales innatas en el músculo. Sin embargo, los estudios que tienen en cuenta y demuestran el dimorfismo sexual celular in vitro son aún escasos y no están bien caracterizados. Aquí, demostramos la capacidad de las células musculares esqueléticas primarias humanas 46XX y 46XY para activar de manera diferente la esteroidogénesis in vitro, probablemente relacionada con el inicio de los cromosomas sexuales, y para inducir de manera diferente la liberación de hormonas después de dosis crecientes de exposición a la testosterona. Las células fueron tratadas con testosterona a concentraciones de 0.5, 2, 5, 10, 32 y 100 nmol/L durante 24 h. Se analizaron las variaciones en la expresión de 17beta-HSD, 5alpha-R2, CYP-19, la liberación de DHT, estradiol y androstenediona, así como la liberación de IL6 e IL8, respectivamente, mediante RT-PCR, ELISA y luminex-assay. Tras los tratamientos con testosterona, y potencialmente a cualquier nivel de concentración, se observó un aumento en la expresión de 17beta-HSD, 5alpha-R2 y CYP-19 en las células 46XY, acompañado de niveles elevados de DHT, androstenediona y liberación de IL6/IL8. Tras el mismo tratamiento, las células 46XX mostraron un aumento en la expresión de 5alpha-R2 y CYP-19, una conversión de andrógenos a estrógenos y una reducción en la liberación de IL6 e IL8. En conclusión, este estudio demostró que las diferencias en los cromosomas sexuales pueden influir en la esteroidogénesis celular muscular in vitro y en la homeostasis hormonal, que son fundamentales para el metabolismo del músculo esquelético.